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禽流感H5+H7疫苗又要换新毒株了!

近日,农业农村部发布第513号和523号公告,共制定了禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗等8种兽药产品制造及检验试行规程、质量标准等。

与现有的疫苗相比,变化比较大。事隔上一次变更新毒株,相隔18个月,时间越来越短,禽流感病毒变异的速度仍然很快。

中华人民共和国农业农村部公告 第513号

根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定,我部组织制定了重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株+H7N9 H7–Re4株)等7种兽药产品工艺规程、质量标准、说明书和内包装标签,现予发布,自发布之日起执行。

特此公告。

 

附件:1. 兽药产品目录

2. 工艺规程

3. 质量标准

4. 说明书和内包装标签

农业农村部

2022年1月2日

附件1

根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定,我部组织制定了重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N2 rHN5801株+rGD59株,H7N9 rHN7903株)的工艺规程、质量标准、说明书和内包装标签,现予发布,自发布之日起执行。

直接点击查看:目前国内禽流感H5疫苗品种和厂家汇总(2021年版)

附件

1、重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株+H7N9 H7–Re4株)说明书

【兽药名称】

通用名 重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株+H7N9 H7–Re4株)

商品名 无

英文名 Reassortant Avian Influenza Virus(H5+H7)Trivalent Vaccine,Inactivated(H5N6 Strain H5–Re13+H5N8 Strain H5–Re14+H7N9 Strain H7–Re4)

汉语拼音 Chongzu Qinliuganbingdu (H5+H7) Sanjia Miehuoyimiao (H5N6 H5–Re13 Zhu+H5N8 H5–Re14 Zhu+H7N9 H7–Re4 Zhu)

【主要成分与含量】 疫苗中含灭活的重组禽流感病毒H5N6亚型H5–Re13株、H5N8亚型H5–Re14株和H7N9亚型H7–Re4株。灭活前其HA效价均为1∶512。

【性状】 乳白色均匀乳剂。

【作用与用途】 用于预防由H5亚型2.3.4.4h分支、2.3.4.4b分支和H7亚型禽流感病毒引起的禽流感。接种后14日产生免疫力,鸡免疫期为6个月;鸭、鹅首免后3周,加强接种1次,免疫期为4个月。

【用法与用量】 胸部肌肉或颈部皮下注射。2~5周龄鸡,每只0.3ml;5周龄以上鸡,每只0.5ml。2~5周龄鸭和鹅,每只0.5ml;5周龄以上鸭和鹅,每只1.0ml。

【不良反应】 一般无可见的不良反应。

【注意事项】 (1)禽流感病毒感染禽或健康状况异常的禽切忌使用本品。

(2)本品严禁冻结。

(3)本品若出现破损、异物或破乳分层等异常现象,切勿使用。

(4)使用前应将疫苗恢复至常温,并充分摇匀。

(5)接种时应使用灭菌器械,及时更换针头,最好1只禽1个针头。

(6)疫苗启封后,限当日用完。

(7)屠宰前28日内禁止使用。

(8)用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

【规格】

【包装】

【贮藏与有效期】 2℃~8℃保存,有效期为12个月。

【批准文号】

【生产企业】

仅在兽医指导下使用

2、重组禽流感病毒(H5亚型)二价灭活疫苗(H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株)说明书

【兽药名称】

通用名 重组禽流感病毒(H5亚型)二价灭活疫苗(H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株)

商品名 无

英文名 Reassortant Avian Influenza Virus (H5 Subtype) Bivalent Vaccine,Inactivated(H5N6 Strain H5–Re13+H5N8 Strain H5–Re14)

汉语拼音 Chongzu Qinliuganbingdu (H5 Yaxing) Erjia Miehuoyimiao (H5N6 H5–Re13 Zhu+H5N8 H5–Re14 Zhu)

【主要成分与含量】 疫苗中含灭活的重组禽流感病毒H5N6亚型H5–Re13株和H5N8亚型H5–Re14株,灭活前HA效价均为1∶256。

【性状】 乳白色均匀乳剂。

【作用与用途】 用于预防由H5亚型2.3.4.4h分支和2.3.4.4b分支禽流感病毒引起的禽流感。接种后14日产生免疫力,鸡免疫期为6个月;鸭、鹅首免后3周,加强接种1次,免疫期为4个月。

【用法与用量】 胸部肌肉或颈部皮下注射。2~5周龄鸡,每只0.3ml;5周龄以上鸡,每只0.5ml。2~5周龄鸭和鹅,每只0.5ml;5周龄以上鸭和鹅,每只1.0ml。

【不良反应】 一般无可见的不良反应。

【注意事项】 (1)禽流感病毒感染禽或健康状况异常的禽切忌使用本品。

(2)本品严禁冻结。

(3)本品若出现破损、异物或破乳分层等异常现象,切勿使用。

(4)使用前应将疫苗恢复至常温,并充分摇匀。

(5)接种时应使用灭菌器械,及时更换针头,最好1只禽1个针头。

(6)疫苗启封后,限当日用完。

(7)屠宰前28日内禁止使用。

(8)用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

【规格】

【包装】

【贮藏与有效期】 2℃~8℃保存,有效期为12个月。

【批准文号】

【生产企业】

仅在兽医指导下使用

3、禽流感病毒H5亚型(H5–Re13株)血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清说明书

【兽药名称】
通用名 禽流感病毒H5亚型(H5–Re13株)血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清
商品名 无
英文名 Avian Influenza Virus(H5 Subtype, Strain H5–Re13)Hemagglutination Inhibition Test Antigen, Positive Sera and Negative Sera
汉语拼音 Qinliuganbingdu H5 Yaxing (H5–Re13 zhu)Xueningyizhishiyan Kangyuan,Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing
【主要成分与含量】 抗原为灭活的H5亚型禽流感病毒(H5–Re13株),血凝(HA)效价不低于1∶128。测定鸡血清时,分别使用禽流感病毒H5亚型(H5–Re13株)鸡阳性血清和禽流感病毒HI试验鸡阴性血清作为对照血清,阳性血清血凝抑制(HI)抗体效价不低于1∶128,阴性血清HI抗体效价不高于1∶4。测定鸭和鹅血清时,分别使用禽流感病毒H5亚型(H5–Re13株)鸭阳性血清和禽流感病毒HI试验鸭阴性血清作为对照血清,处理后的鸭阳性血清HI抗体效价不低于1∶80,阴性血清HI抗体效价低于1∶10。
【性状】 抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块;阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块。易于与瓶壁脱离,加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】 用于HI试验检测禽流感病毒H5亚型(H5–Re13株)抗体。
【用法与判定】
1 材料
1.1 96孔V型(90度)微量反应板、单道及多道微量移液器(配有吸头)、加样槽、吸管、烧杯等。
1.2 pH值7.0~7.2 0.01mol/L PBS 按照如下方法配制或购买商品化产品,PBS一经使用,于2℃~8℃保存不超过3周。PBS 配制方法:秤量NaCl 80g、KCl 2g 、十二水磷酸氢二钠 36.3g、磷酸二氢钾 2.4g,溶解于ddH2O中,并定容10L,用氢氧化钠或盐酸调pH至7.0~7.2,最后121℃灭菌30分钟或过滤后使用。
1.3 阿氏(Alsevers)液 称葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g,加蒸馏水至100ml,加热溶解后调pH值至6.1,69Kpa 15min高压灭菌,2℃~8℃保存备用。
1.4 1%鸡红细胞悬液 采取2~4只 2~6月龄SPF鸡的血液,与等量阿氏液混合,然后用PBS(0.01mol/L,pH值7.0~7.2,下同)洗涤3~4次,每次以1500r/min离心5~10分钟,将沉积的红细胞用PBS配制成1%悬液。
1.5 抗原溶解 冻干的抗原和血清均按瓶签规格标注的量,用PBS溶解。
2 操作术式
2.1 血凝(HA)试验
2.1.1 在V型微量反应板中,每孔加0.025ml PBS。
2.1.2 第l孔加0.025ml抗原,反复抽打3~5次混匀。
2.1.3 从第1孔吸取0.025ml抗原加入第2孔,混匀后吸取0.025ml加入第3孔,如此进行2倍系列稀释至第11孔,从第11孔吸取0.025ml弃去。
2.1.4 每孔加0.025ml PBS。
2.1.5 每孔加入0.025ml 1%(V/V)鸡红细胞悬液。
2.1.6 结果判定 将反应板在振荡器上震荡1~2分钟或轻扣反应板混合反应物,置室温20~30分钟或置2~8℃ 45~60分钟,当对照孔的红细胞呈显著纽扣状时判定结果。判定时,将反应板倾斜60度,观察红细胞有无泪珠状流淌,完全无泪珠样流淌(100%凝集)的最高稀释倍数判为血凝效价。
2.2 血凝抑制(HI)试验
2.2.1 根据HA试验测定的效价,如果抗原凝集价测定结果为1∶1024(举例),4个血凝单位(即4 HAU)=1024/4=256(即1∶256)。取PBS 9.0ml,加抗原 1.0ml,即成1∶10稀释,将1∶10稀释液 1.0ml加入到 24.6 ml PBS中,使最终浓度为1∶256。
2.2.2 四个单位血凝单位检测 检查4 HAU的血凝价是否准确,应将配制的1∶256稀释液进行系列稀释,使最终稀释度为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6和1∶7。然后,从每一稀释度中取0.025ml,加入PBS 0.025ml,再加入1%鸡红细胞悬液0.025ml,混匀。
将血凝板置室温20~40分钟或置2~8℃ 40~60分钟,如果配制的抗原液为4 HAU,则1∶4稀释度将给出凝集终点;如果4 HAU高于4个单位,可能1∶5或1∶6为终点;如果较低,可能1∶2或1∶3为终点。应根据检验结果将抗原稀释度做适当调整,使工作液确为4 HAU。
2.2.3 第2~11孔加入0.025ml PBS,第12孔加入0.05ml PBS。
2.2.4 第1~2孔加入0.025ml血清,第2孔血清与PBS充分混匀后吸0.025ml于第3孔,依次2倍系列稀释至第10孔,从第10孔吸取0.025ml弃去。
2.2.5 第1~11孔均加入0.025ml的4HAU抗原,在室温(20~25℃)下静置至少20分钟或2℃~8℃ 至少60分钟。
2.2.6 每孔加入0.025ml 1%(V/V)的鸡红细胞悬液,震荡混匀,在室温(20~25℃)下静置20~40分钟或2℃~8℃ 40~60分钟,对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。
3 结果判定 以完全抑制4 HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI抗体效价。当阳性对照血清的HI抗体效价与已知抗体效价误差不超过1个滴度,鸡阴性对照血清抗体效价不高于1∶4(若用处理后的鸭阴性血清,则抗体效价应低于1∶10)时,试验方可成立。检测鸡血清时,被检血清HI抗体效价不高于1∶8判为阴性,不低于1∶16判为阳性;检测处理后的鸭和鹅血清时,被检血清HI抗体效价低于1∶10判为阴性,不低于1∶10判为阳性。
【注意事项】 (1)HA和HI试验影响因素甚多,应严格控制试验条件。每加一试剂或样品后需更换吸头,同时应严格控制作用温度和时间。
(2)准确配制红细胞悬液,使用时应随时振摇。
(3)用pH值7.0~7.2的PBS(0.01mol/L)作为稀释液。
(4)抗原和阴、阳性血清若有污染,应废弃。
(5)准确配制4HAU抗原,使用前需进行滴定,滴定好的抗原应在2小时内用完。
(6)抗原和血清按规定保存。冻干试剂应按规定的体积用PBS溶解。溶解后2℃~8℃保存不超过1个月。
(7)同一亚型不同毒株的HI试验抗原,若抗原性存在差异,则检测同一血清的HI抗体效价不同。
(8)鸭、鹅血清一般需进行非特异性凝集抑制素的处理,并以鸭阳性血清作为HI试验阳性对照血清。处理参考如下方法,可根据本实验室实际情况选择使用。
① 胰酶–加热–高碘酸盐法
A. 取0.3ml血清,加0.15ml胰酶溶液(8 mg/ml:200mg的P–250胰酶溶解于25ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中,混匀,过滤除菌,分装并在–15℃以下保存,保存期6个月),混匀后,在56℃水浴灭活30分钟后冷却至室温。
B. 再加入0.9ml高碘酸钾(将230mg的KIO4用0.01mol/L, PH 7.0–7.2的PBS,定容至100ml,过滤除菌后避光室温保存,保存期1周),混合,室温孵育15分钟。
C. 再加入0.9ml的丙三醇盐溶液(1ml的丙三醇加入到99ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中,混匀,过滤除菌,室温保存),混合,室温孵育15分钟。
D. 最后加入0.75ml生理盐水,混匀,置4℃保存备用。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
② 受体破坏酶(RDE)处理法
A. 取1体积血清(50μl),加4体积RDE(200μl),37℃水浴18小时(过夜)。
B. 再加入5体积(250μl)的1.5%浓度的柠檬酸钠,混匀,置56℃水浴30分钟(以破坏残余的RDE活性)。
C. 将1体积的50%的红细胞加入到10体积RDE处理的血清中(50μl红细胞+500μl血清),震荡混匀后4℃放置1小时,期间可轻轻摇匀悬浮红细胞数次。
D. 然后1000g离心10分钟,小心吸取上层上清,用于检测。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
【规格】 (1)1ml/瓶 (2)2ml/瓶
【包装】
【贮藏与有效期】 −15℃以下保存,有效期为24个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

4、禽流感病毒H5亚型(H5–Re14株)血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清说明书

【兽药名称】
通用名 禽流感病毒H5亚型(H5–Re14株)血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清
商品名 无
英文名 Avian Influenza Virus(H5 Subtype, Strain H5–Re14)Hemagglutination Inhibition Test Antigen, Positive Sera and Negative Sera
汉语拼音 Qinliuganbingdu H5 Yaxing (H5–Re14 zhu)Xueningyizhishiyan Kangyuan,Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing
【主要成分与含量】 抗原为灭活的H5亚型禽流感病毒(H5–Re14株),血凝(HA)效价不低于1∶128。测定鸡血清时,分别使用禽流感病毒H5亚型(H5–Re14株)鸡阳性血清和禽流感病毒HI试验鸡阴性血清作为对照血清,阳性血清血凝抑制(HI)抗体效价不低于1∶128,阴性血清HI抗体效价不高于1∶4。测定鸭和鹅血清时,分别使用禽流感病毒H5亚型(H5–Re14株)鸭阳性血清和禽流感病毒HI试验鸭阴性血清作为对照血清,处理后的鸭阳性血清HI抗体效价不低于1∶80,阴性血清HI抗体效价低于1∶10。
【性状】 抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块;阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块。易于与瓶壁脱离,加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】 用于HI试验检测禽流感病毒H5亚型(H5–Re14株)抗体。
【用法与判定】
1 材料
1.1 96孔V型(90度)微量反应板、单道及多道微量移液器(配有吸头)、加样槽、吸管、烧杯等。
1.2 pH值7.0~7.2 0.01mol/L PBS 按照如下方法配制或购买商品化产品,PBS一经使用,于2℃~8℃保存不超过3周。PBS 配制方法:秤量NaCl 80g、KCl 2g 、十二水磷酸氢二钠 36.3g、磷酸二氢钾 2.4g,溶解于ddH2O中,并定容10L,用氢氧化钠或盐酸调pH至7.0~7.2,最后121℃灭菌30分钟或过滤后使用。
1.3 阿氏(Alsevers)液 称葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g,加蒸馏水至100ml,加热溶解后调pH值至6.1,69Kpa 15min高压灭菌,2℃~8℃保存备用。
1.4 1%鸡红细胞悬液 采取2~4只 2~6月龄SPF鸡的血液,与等量阿氏液混合,然后用PBS(0.01mol/L,pH值7.0~7.2,下同)洗涤3~4次,每次以1500r/min离心5~10分钟,将沉积的红细胞用PBS配制成1%悬液。
1.5 抗原溶解 冻干的抗原和血清均按瓶签规格标注的量,用PBS溶解。
2 操作术式
2.1 血凝(HA)试验
2.1.1 在V型微量反应板中,每孔加0.025ml PBS。
2.1.2 第l孔加0.025ml抗原,反复抽打3~5次混匀。
2.1.3 从第1孔吸取0.025ml抗原加入第2孔,混匀后吸取0.025ml加入第3孔,如此进行2倍系列稀释至第11孔,从第11孔吸取0.025ml弃去。
2.1.4 每孔加0.025ml PBS。
2.1.5 每孔加入0.025ml 1%(V/V)鸡红细胞悬液。
2.1.6 结果判定 将反应板在振荡器上震荡1~2分钟或轻扣反应板混合反应物,置室温20~30分钟或置2~8℃ 45~60分钟,当对照孔的红细胞呈显著纽扣状时判定结果。判定时,将反应板倾斜60度,观察红细胞有无泪珠状流淌,完全无泪珠样流淌(100%凝集)的最高稀释倍数判为血凝效价。
2.2 血凝抑制(HI)试验(鸭、鹅血清,必要时需要进行前处理,参考方法见注意事项)
2.2.1 根据HA试验测定的效价,如果抗原凝集价测定结果为1∶1024(举例),4个血凝单位(即4 HAU)=1024/4=256(即1∶256)。取PBS 9.0ml,加抗原 1.0ml,即成1∶10稀释,将1∶10稀释液 1.0ml加入到 24.6 ml PBS中,使最终浓度为1∶256。
2.2.2 四个单位血凝单位检测 检查4 HAU的血凝价是否准确,应将配制的1∶256稀释液进行系列稀释,使最终稀释度为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6和1∶7。然后,从每一稀释度中取0.025ml,加入PBS 0.025ml,再加入1%鸡红细胞悬液0.025ml,混匀。将血凝板置室温20~40分钟或置2~8℃ 40~60分钟,如果配制的抗原液为4 HAU,则1∶4稀释度将给出凝集终点;如果4 HAU高于4个单位,可能1∶5或1∶6为终点;如果较低,可能1∶2或1∶3为终点。应根据检验结果将抗原稀释度做适当调整,使工作液确为4 HAU。
2.2.3 第2~11孔加入0.025ml PBS,第12孔加入0.05ml PBS。
2.2.4 第1~2孔加入0.025ml血清,第2孔血清与PBS充分混匀后吸0.025ml于第3孔,依次2倍系列稀释至第10孔,从第10孔吸取0.025ml弃去。
2.2.5 第1~11孔均加入0.025ml的4HAU抗原,在室温(20~25℃)下静置至少20分钟或2℃~8℃ 至少60分钟。
2.2.6 每孔加入0.025ml 1%(V/V)的鸡红细胞悬液,震荡混匀,在室温(20~25℃)下静置20~40分钟或2℃~8℃ 40~60分钟,对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。
3 结果判定 以完全抑制4 HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI抗体效价。当阳性对照血清的HI抗体效价与已知抗体效价误差不超过1个滴度,鸡阴性对照血清抗体效价不高于1∶4(若用处理后的鸭阴性血清,则抗体效价应低于1∶10)时,试验方可成立。检测鸡血清时,被检血清HI抗体效价不高于1∶8判为阴性,不低于1∶16判为阳性;检测处理后的鸭和鹅血清时,被检血清HI抗体效价低于1∶10判为阴性,不低于1∶10判为阳性。
【注意事项】 (1)HA和HI试验影响因素甚多,应严格控制试验条件。每加一试剂或样品后需更换吸头,同时应严格控制作用温度和时间。
(2)准确配制红细胞悬液,使用时应随时振摇。
(3)用pH值7.0~7.2的PBS(0.01mol/L)作为稀释液。
(4)抗原和阴、阳性血清若有污染,应废弃。
(5)准确配制4HAU抗原,使用前需进行滴定,滴定好的抗原应在2小时内用完。
(6)抗原和血清按规定保存。冻干试剂应按规定的体积用PBS溶解。溶解后2℃~8℃保存不超过1个月。
(7)同一亚型不同毒株的HI试验抗原,若抗原性存在差异,则检测同一血清的HI抗体效价不同。
(8)鸭、鹅血清一般需进行非特异性凝集抑制素的处理,并以鸭阳性血清作为HI试验阳性对照血清。处理参考如下方法,可根据本实验室实际情况选择使用。
① 胰酶–加热–高碘酸盐法
A. 取0.3ml血清,加0.15ml胰酶溶液(8 mg/ml:200mg的P–250胰酶溶解于25ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中,混匀,过滤除菌,分装并在–15℃以下保存,保存期6个月),混匀后,在56℃水浴灭活30分钟后冷却至室温。
B. 再加入0.9ml高碘酸钾(将230mg的KIO4用0.01mol/L, PH 7.0–7.2的PBS,定容至100ml,过滤除菌后避光室温保存,保存期1周),混合,室温孵育15分钟。
C. 再加入0.9ml的丙三醇盐溶液(1ml的丙三醇加入到99ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中,混匀,过滤除菌,室温保存),混合,室温孵育15分钟。
D. 最后加入0.75ml生理盐水,混匀,置4℃保存备用。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
② 受体破坏酶(RDE)处理法
A. 取1体积血清(50μl),加4体积RDE(200μl),37℃水浴18小时(过夜)。
B. 再加入5体积(250μl)的1.5%浓度的柠檬酸钠,混匀,置56℃水浴30分钟(以破坏残余的RDE活性)。
C. 将1体积的50%的红细胞加入到10体积RDE处理的血清中(50μl红细胞+500μl血清),震荡混匀后4℃放置1小时,期间可轻轻摇匀悬浮红细胞数次。
D. 然后1000g离心10分钟,小心吸取上层上清,用于检测。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
【规格】 (1)1ml/瓶 (2)2ml/瓶
【包装】
【贮藏与有效期】 −15℃以下保存,有效期为24个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

5、禽流感病毒H7亚型(H7–Re4株)血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清说明书

【兽药名称】
通用名 禽流感病毒H7亚型(H7–Re4株)血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清
商品名 无
英文名 Avian Influenza Virus(H7 Subtype, Strain H7–Re4)Hemagglutination Inhibition Test Antigen, Positive Sera and Negative Sera
汉语拼音 Qinliuganbingdu H7 Yaxing (H7–Re4 zhu)Xueningyizhishiyan Kangyuan, Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing
【主要成分与含量】 抗原为灭活的H7亚型禽流感病毒(H7–Re4株),血凝(HA)效价不低于1∶128。测定鸡血清时,分别使用禽流感病毒H7亚型(H7–Re4株)鸡阳性血清和禽流感病毒HI试验鸡阴性血清作为对照血清,阳性血清血凝抑制(HI)抗体效价不低于1∶128,阴性血清HI抗体效价不高于1∶4。测定鸭和鹅血清时,分别使用禽流感病毒H7亚型(H7–Re4株)鸭阳性血清和禽流感病毒HI试验鸭阴性血清作为对照血清,处理后的鸭阳性血清HI抗体效价不低于1∶80,阴性血清HI抗体效价低于1∶10。
【性状】 抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块;阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块。易于与瓶壁脱离,加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】 用于HI试验检测禽流感病毒H7亚型(H7–Re4株)抗体。
【用法与判定】
1 材料
1.1 96孔V型(90度)微量反应板、单道及多道微量移液器(配有吸头)、加样槽、吸管、烧杯等。
1.2 pH值7.0~7.2 0.01mol/L PBS 按照如下方法配制或购买商品化产品,PBS一经使用,于2℃~8℃保存不超过3周。PBS 配制方法:秤量NaCl 80g、KCl 2g 、十二水磷酸氢二钠 36.3g、磷酸二氢钾 2.4g,溶解于ddH2O中,并定容10L,用氢氧化钠或盐酸调pH至7.0~7.2,最后121℃灭菌30分钟或过滤后使用。
1.3 阿氏(Alsevers)液 称葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g,加蒸馏水至100ml,加热溶解后调pH值至6.1,69Kpa 15min高压灭菌,2℃~8℃保存备用。
1.4 1%鸡红细胞悬液 采取2~4只 2~6月龄SPF鸡的血液,与等量阿氏液混合,然后用PBS(0.01mol/L,pH值7.0~7.2,下同)洗涤3~4次,每次以1500r/min离心5~10分钟,将沉积的红细胞用PBS配制成1%悬液。
1.5 抗原溶解 冻干的抗原和血清均按瓶签规格标注的量,用PBS溶解。
2  操作术式
2.1 血凝(HA)试验
2.1.1 在V型微量反应板中,每孔加0.025ml PBS。
2.1.2 第l孔加0.025ml抗原,反复抽打3~5次混匀。
2.1.3 从第1孔吸取0.025ml抗原加入第2孔,混匀后吸取0.025ml加入第3孔,如此进行2倍系列稀释至第11孔,从第11孔吸取0.025ml弃去。
2.1.4 每孔加0.025ml PBS。
2.1.5 每孔加入0.025ml 1%(V/V)鸡红细胞悬液。
2.1.6 结果判定 将反应板在振荡器上震荡1~2分钟或轻扣反应板混合反应物,置室温20~30分钟或置2~8℃ 45~60分钟,当对照孔的红细胞呈显著纽扣状时判定结果。判定时,将反应板倾斜60度,观察红细胞有无泪珠状流淌,完全无泪珠样流淌(100%凝集)的最高稀释倍数判为血凝效价。
2.2 血凝抑制(HI)试验
2.2.1 根据HA试验测定的效价,如果抗原凝集价测定结果为1∶1024(举例),4个血凝单位(即4 HAU)=1024/4=256(即1∶256)。取PBS 9.0ml,加抗原 1.0ml,即成1∶10稀释,将1∶10稀释液 1.0ml加入到 24.6 ml PBS中,使最终浓度为1∶256。
2.2.2 四个单位血凝单位检测 检查4 HAU的血凝价是否准确,应将配制的1∶256稀释液进行系列稀释,使最终稀释度为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6和1∶7。然后,从每一稀释度中取0.025ml,加入PBS 0.025ml,再加入1%鸡红细胞悬液0.025ml,混匀。将血凝板置室温20~40分钟或置2~8℃ 40~60分钟,如果配制的抗原液为4 HAU,则1∶4稀释度将给出凝集终点;如果4 HAU高于4个单位,可能1∶5或1∶6为终点;如果较低,可能1∶2或1∶3为终点。应根据检验结果将抗原稀释度做适当调整,使工作液确为4 HAU。
2.2.3 第2~11孔加入0.025ml PBS,第12孔加入0.05ml PBS。
2.2.4 第1~2孔加入0.025ml血清,第2孔血清与PBS充分混匀后吸0.025ml于第3孔,依次2倍系列稀释至第10孔,从第10孔吸取0.025ml弃去。
2.2.5 第1~11孔均加入0.025ml的4HAU抗原,在室温(20~25℃)下静置至少20分钟或2℃~8℃ 至少60分钟。
2.2.6 每孔加入0.025ml 1%(V/V)的鸡红细胞悬液,震荡混匀,在室温(20~25℃)下静置20~40分钟或2℃~8℃ 40~60分钟,对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。
3 结果判定 以完全抑制4 HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI抗体效价。当阳性对照血清的HI抗体效价与已知抗体效价误差不超过1个滴度,鸡阴性对照血清抗体效价不高于1∶4(若用处理后的鸭阴性血清,则抗体效价应低于1∶10)时,试验方可成立。检测鸡血清时,被检血清HI抗体效价不高于1∶8判为阴性,不低于1∶16判为阳性;检测处理后的鸭和鹅血清时,被检血清HI抗体效价低于1∶10判为阴性,不低于1∶10判为阳性。
【注意事项】 (1)HA和HI试验影响因素甚多,应严格控制试验条件。每加一试剂或样品后需更换吸头,同时应严格控制作用温度和时间。
(2)准确配制红细胞悬液,使用时应随时振摇。
(3)用pH值7.0~7.2的PBS(0.01mol/L)作为稀释液。
(4)抗原和阴、阳性血清若有污染,应废弃。
(5)准确配制4HAU抗原,使用前需进行滴定,滴定好的抗原应在2小时内用完。
(6)抗原和血清按规定保存。冻干试剂应按规定的体积用PBS溶解。溶解后2℃~8℃保存不超过1个月。
(7)同一亚型不同毒株的HI试验抗原,若抗原性存在差异,则检测同一血清的HI抗体效价不同。
(8)鸭、鹅血清一般需进行非特异性凝集抑制素的处理,并以鸭阳性血清作为HI试验阳性对照血清。处理参考如下方法,可根据本实验室实际情况选择使用。
① 胰酶–加热–高碘酸盐法
A. 取0.3ml血清,加0.15ml胰酶溶液(8 mg/ml:200mg的P–250胰酶溶解于25ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中,混匀,过滤除菌,分装并在–15℃以下保存,保存期6个月),混匀后,在56℃水浴灭活30分钟后冷却至室温。
B. 再加入0.9ml高碘酸钾(将230mg的KIO4用0.01mol/L, PH 7.0–7.2的PBS,定容至100ml,过滤除菌后避光室温保存,保存期1周),混合,室温孵育15分钟。
C. 再加入0.9ml的丙三醇盐溶液(1ml的丙三醇加入到99ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中,混匀,过滤除菌,室温保存),混合,室温孵育15分钟。
D. 最后加入0.75ml生理盐水,混匀,置4℃保存备用。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
② 受体破坏酶(RDE)处理法
A. 取1体积血清(50μl),加4体积RDE(200μl),37℃水浴18小时(过夜)。
B. 再加入5体积(250μl)的1.5%浓度的柠檬酸钠,混匀,置56℃水浴30分钟(以破坏残余的RDE活性)。
C. 将1体积的50%的红细胞加入到10体积RDE处理的血清中(50μl红细胞+500μl血清),震荡混匀后4℃放置1小时,期间可轻轻摇匀悬浮红细胞数次。
D. 然后1000g离心10分钟,小心吸取上层上清,用于检测。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
【规格】 (1)1ml/瓶 (2)2ml/瓶
【包装】
【贮藏与有效期】 −15℃以下保存,有效期为24个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

6、重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(细胞源,H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株+H7N9 H7–Re4株)说明书

【兽药名称】
通用名 重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(细胞源,H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株+H7N9 H7–Re4株)
商品名 无
英文名 Reassortant Avian Influenza Virus(H5+H7)Trivalent Vaccine,Inactivated(Cell Source,H5N6 Strain H5–Re13+H5N8 Strain H5–Re14+H7N9 Strain H7–Re4)
汉语拼音 Chongzu Qinliugan Bingdu(H5+H7)Sanjia Miehuoyimiao(Xibaoyuan,H5N6 H5–Re13 Zhu+H5N8 H5–Re14 Zhu+H7N9 H7–Re4 Zhu)
【主要成分与含量】 疫苗中含灭活的经MDCK细胞增殖的重组禽流感病毒H5N6亚型H5–Re13株、H5N8亚型H5–Re14株和H7N9亚型H7–Re4株。灭活前其HA效价均为1∶512。
【性状】 乳白色均匀乳剂。
【作用与用途】 用于预防由H5亚型2.3.4.4h分支、2.3.4.4b分支和H7亚型禽流感病毒引起的禽流感。接种后14日产生免疫力,鸡免疫期为6个月;鸭、鹅首免后3周,加强接种1次,免疫期为4个月。
【用法与用量】 胸部肌肉或颈部皮下注射。2~5周龄鸡,每只0.3ml;5周龄以上鸡,每只0.5ml。2~5周龄鸭和鹅,每只0.5ml;5周龄以上鸭和鹅,每只1.0ml。
【不良反应】 一般无可见的不良反应。
【注意事项】 (1)禽流感病毒感染禽或健康状况异常的禽切忌使用本品。
(2)本品严禁冻结。
(3)本品若出现破损、异物或破乳分层等异常现象,切勿使用。
(4)使用前应将疫苗恢复至常温,并充分摇匀。
(5)接种时应使用灭菌器械,及时更换针头,最好1只禽1个针头。
(6)疫苗启封后,限当日用完。
(7)屠宰前28日内禁止使用。
(8)用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。
【规格】
【包装】
【贮藏与有效期】 2℃~8℃保存,有效期为12个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅在兽医指导下使用

7、重组禽流感病毒(H5亚型)二价灭活疫苗(细胞源,H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株)说明书

【兽药名称】
通用名 重组禽流感病毒(H5亚型)二价灭活疫苗(细胞源,H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株)
商品名 无
英文名 Reassortant Avian Influenza Virus (H5 Subtype) Bivalent Vaccine,Inactivated(Cell Source,H5N6 Strain H5–Re13+H5N8 Strain H5–Re14)
汉语拼音 Chongzu Qinliuganbingdu (H5 Yaxing) Erjia Miehuoyimiao (Xibaoyuan,H5N6 H5–Re13 Zhu+H5N8 H5–Re14 Zhu)
【主要成分与含量】 疫苗中含灭活的经MDCK细胞增殖的重组禽流感病毒H5N6亚型H5–Re13株和H5N8亚型H5–Re14株,灭活前HA效价均为1∶256。
【性状】 乳白色均匀乳剂。
【作用与用途】 用于预防由H5亚型2.3.4.4h分支和2.3.4.4b分支禽流感病毒引起的禽流感。接种后14日产生免疫力,鸡免疫期为6个月;鸭、鹅首免后3周,加强接种1次,免疫期为4个月。
【用法与用量】 胸部肌肉或颈部皮下注射。2~5周龄鸡,每只0.3ml;5周龄以上鸡,每只0.5ml。2~5周龄鸭和鹅,每只0.5ml;5周龄以上鸭和鹅,每只1.0ml。
【不良反应】 一般无可见的不良反应。
【注意事项】 (1)禽流感病毒感染禽或健康状况异常的禽切忌使用本品。
(2)本品严禁冻结。
(3)本品若出现破损、异物或破乳分层等异常现象,切勿使用。
(4)使用前应将疫苗恢复至常温,并充分摇匀。
(5)接种时应使用灭菌器械,及时更换针头,最好1只禽1个针头。
(6)疫苗启封后,限当日用完。
(7)屠宰前28日内禁止使用。
(8)用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。
【规格】
【包装】
【贮藏与有效期】 2℃~8℃保存,有效期为12个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅在兽医指导下使用

8、重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N2 rHN5801株+rGD59株,H7N9 rHN7903株)说明书

【兽药名称】

通用名 重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N2 rHN5801株+ rGD59株,H7N9 rHN7903株)

英文名 Reassortant Avian Influenza Virus(H5+H7) Trivalent Vaccine,Inactivated(H5N2 Strain rHN5801+ Strain rGD59,H7N9 Strain rHN7903)

汉语拼音 Chongzu Qinliuganbingdu (H5+H7) Sanjia Miehuoyimiao(H5N2 rHN5801 Zhu + rGD59 Zhu,H7N9 rHN7903 Zhu)

【主要成分与含量】 疫苗中含有灭活的H5N2亚型重组禽流感病毒rHN5801株、rGD59株和H7N9亚型重组禽流感病毒rHN7903株。灭活后H5亚型rHN5801株和rGD59株鸡胚液HA效价为1∶512,H7N9亚型rHN7903株鸡胚液HA效价为1∶512。

【性状】 乳白色均匀乳剂。

【作用与用途】 用于预防由H5亚型2.3.4.4b分支、2.3.4.4h分支和H7亚型禽流感病毒引起的禽流感。免疫后14日产生免疫力,对雏鸡、雏鸭和雏鹅一次免疫的持续期为2个月。

【用法与用量】 颈后背部皮下或肌肉注射。2~5周龄鸡,每只0.3ml;5周龄以上鸡,每只0.5ml;5周龄以内雏鸭、雏鹅,每只0.5ml;5周龄以上鸭、鹅,每只1.0ml;种鸡、种鸭、种鹅,建议开产前加强免疫2次。

【注意事项】 (1)本品不能冻结保存。

(2)疫苗使用前应充分摇匀,并使疫苗升至室温。

(3)如果疫苗出现明显的水、油分层,应废弃不予使用。疫苗久置,在表面有少量白油,经振荡混匀后不影响使用。

(4)接种后一般无明显不良反应,有的在接种后1~2日内可能有减食现象。

(5)用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

(6)上市前28日内禁止使用。

【贮藏与有效期】 2℃~8℃保存,有效期为12个月。

图片

瑞普生物2022年2月22日发布公告介绍,当前我国流行的 H5Nx 亚型高致病性禽流感依然保持多血清亚型、多基因型、多致病型毒株并存的特点,感染宿主范围广泛,优势流行病毒为 H5N8 亚型
(Clade 2.3.4.4b)及 H5N6 亚型(Clade 2.3.4.4h)禽流感病毒;2021 年以来,H7Nx亚型禽流感病毒出现明显的抗原变异,并迅速蔓延到全国多地,给疫病防控带来新的挑战。

“重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N2 rHN5803 株+rGD59 株,H7N9 rHN7903 株)”作为“重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N2 rSD57株+rFJ56 株,H7N9 rLN79 株)(禽元+)”的全新升级产品,采用针对当前流行H5N8 亚型、H5N6 亚型及 H7N9 亚型禽流感病毒的代表毒株作为基因供体,利用具有自主知识产权的 D7 株反向遗传技术平台拯救获得全新疫苗种毒 rHN5801株、rGD59 株和 rHN7903 株,结合先进的疫苗生产工艺制备而成。

本产品对目前流行的 H5N8 亚型(Clade 2.3.4.4b)和 H5N6 亚型(Clade 2.3.4.4h)高致病性禽流感病毒以及 H7N9 亚型禽流感病毒流行毒株均具有良好的免疫保护效果,是国内针对禽流感病毒多亚型、多基因型毒株的三价灭活疫苗之一,可实现针对包括水禽、家禽等多种靶动物的全覆盖免疫保护,疫苗覆盖性广、抗原匹配性高,能够有效防控当前 H5、H7 亚型高致病性禽流感的发生。

来源:大畜牧综合农业农村部和企业公告

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