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中国动物疫病预控中心权威发布:非洲猪瘟现场排查手册

前  言

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病,发病率和死亡率可达100%。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,我国将其列为一类动物疫病。

非洲猪瘟病毒不感染人,该病不是人畜共患病,无公共健康危害。但是,由于目前尚无有效的疫苗和治疗方法,任其流行会给养猪业带来巨大经济损失和造成严重的社会影响,并冲击畜产品国际贸易。我国是世界第一养猪大国,饲养量占世界总量的50%左右,切实做好非洲猪瘟防控工作,事关我国养猪业持续健康发展,意义重大。

本手册面向从事非洲猪瘟现场排查的一线防疫人员,提供了简明实用的相关操作技术与方法,为非洲猪瘟现场排查等相关工作提供参考。

一、非洲猪瘟现场排查流程

二、准备工作

1、人员准备

□ 了解非洲猪瘟基本知识(基本的生物学特征、流行病学特点、临床表现、剖检病理变化等)。

□ 了解非洲猪瘟感染与传播的高风险因素(饲喂泔水、生物安全水平低、动物贩运、猪肉及其制品流通)。

□ 了解排查工作中需遵守的生物安全操作要求,避免人为造成的传播。

□ 养殖户等相关人员可能面临较大压力,应注意工作方式方法。

2、车辆准备

□ 车辆必须彻底清洗消毒。

□ 车辆不携带无关物品。

□ 在车内、车的后备箱里铺塑料布防止污染。

3、物品准备(生物安全防护及采样所需物品)

排查采样物品清单:

(1)进场所需材料清单

(2)采样所需材料清单

一般材料

□ 标签和记号笔;

□ 数据记录表、笔、写字板;

□ 盛放针头和刀片的锐器盒;

□ 高压灭菌袋;

□ 用于环境采样的拭子和盛放拭子用的离心管;

样品包装运输所需材料

□ 容器 / 离心管 / 小瓶 ( 防漏并标示清楚);

□ 吸水纸;

□ 密封性好的容器或袋子,作为二次包装( 即防漏)、用于储存动物样品的容器和采血管;

□ 冷藏箱 (+4℃ );

□ 便携式 -80℃冷冻箱 / 干冰 / 液氮罐( 仅在远离设备齐全的实验室进行取样时才需要);

□ 保定动物的材料 ( 如,套索、木板);

采血所需材料

□ 消毒剂和脱脂棉(酒精棉);

□ 不 含 抗 凝 剂 的 无 菌 采 血 管(10ml)( 红色盖子);

□ 含有EDTA的无菌采血管(10ml)( 紫色盖子);

□ 根据猪的大小和采样部位 ( 颈静脉、耳缘静脉) 选取真空采血管或10-20ml 注射器;

组织采样所需材料

□ 样品架或冻存盒,装有足量冰 /冰袋的冰盒;

□ 用于收集病料的 2ml 无菌冻存管( 采完的样品放在冰上) 或小号密封袋;

□ 带刀片的手术刀、镊子和剪刀;

□ 盛有消毒剂的容器,用于对刀、剪刀进行消毒,避免不同脏器和不同动物个体之间的交叉污染;

□ 如进行病理学检查,可使用密封的塑料容器,内装10% 中性福尔马林缓冲液( 动物脏器体积: 福尔马林体积比为1:10);

□ 处置动物尸体所需的适当材料。

三、进出养殖场要求

1、 抵达养殖场

□ 车辆停在养殖场入口附近,不得驶进场内。

□ 在养殖场指定的地点(清洁区),穿戴个人防护设备(如需要,应遵循养殖场的要求进行个人防护),并进行物资的准备、制备消毒剂等。

□ 进入养殖场生产区域前,脱下和摘掉不必要的衣服和物品 ( 夹克、领带、手表等),清空衣服口袋,按照养殖场进场程序(沐浴洗澡或其他方式)进入生产区域。

□ 电子设备 ( 移动电话等 ) 应放置在密封的塑料袋中,以便随后进行清洁和消毒。在养殖场内,只能通过塑料袋使用手机,不要从袋子里拿出。

□ 其他非一次性物品,应在消毒后进场。如需要,应按照养殖场物资进场程序进行消毒后进场。

□ 消毒工作要在清洁干燥的地面进行(最好是混凝土地面),应划分清洁和非清洁区并保证界线清晰。

2、 穿戴个人防护设备( 在清洁区)

□ 脱下鞋子,并放在塑料布上。

□ 在遵守养殖场进场要求的前提下,部分场需要脱去全部个人衣服,洗澡后穿戴养殖场内部衣服方可进场。

□ 部分场可以首先穿戴一次性防护服,穿上靴子。戴手套,手套要用胶带封上。

□ 如果需要穿防水服,防水服应套在靴子外层。再戴一层手套,方便中间更换。

□ 靴套至少覆盖胶鞋底部和下部。

□ 进场前,戴口罩并仔细检查物品清单。

3、 离场前准备

□ 在非清洁区域对接触过养殖场的所有物品进行清洗和消毒处理。

□ 对盛放样品容器的表面进行消毒,然后放在清洁区。

□ 脱下鞋套放入非清洁区的垃圾袋中,然后彻底擦洗靴子 ( 特别是鞋底)。

□ 脱下手套并放入非清洁区的垃圾袋中。

□ 脱下一次性防护服并放入非清洁区的垃圾袋中。

□ 脱下靴子,对靴子进行消毒后放入清洁的袋子里。

□ 手和眼镜也必须进行消毒,并用消毒湿巾清洁脸部。

□ 进入生产区域的人员在指定区域进行沐浴洗澡更衣后方可离开。

□ 非一次性物品(胶靴等)和盛放样品的容器用双层袋盛放并胶带封装。可穿回日常的鞋子。

□ 携带出养殖场的袋子需放在车辆内预先铺好的塑料布上。

□ 进入生产区域的人员在指定区域进行沐浴洗澡更衣后方可离开。

□ 接触过样品或潜在污染的车辆进行重点清洗消毒。

□ 在离开可能受到污染的区域之前,清洁和消毒汽车的轮胎和表面。清除所有可见的污垢。不要忘记清理隐藏的区域,如车轮拱、轮胎板和汽车底部。清除所有污垢后,用消毒剂喷洒表面。

□ 处理车内所有垃圾并清理所有污垢 ( 应妥善处理垃圾 )。

□ 用浸有消毒剂的布擦拭方向盘、变速杆、踏板、手闸等。

4、 离场后

□ 如家中没有饲养生猪,可以回家淋浴并彻底清洗头发。将当天所穿衣服浸泡在消毒剂中30 分钟;如果家中饲养生猪,应在其他地方进行清洗。

□ 如果进入了疑似感染场,确诊前不应前往任何饲养生猪的场所。如果确认该场感染了非洲猪瘟,三天内不应前往任何有猪的场所。

□ 再次对汽车内部和外部进行消毒。清除汽车上的所有塑料布,并妥善处理。

5、消毒剂的选择

非洲猪瘟病毒对热的抵抗力较弱,一般的消毒措施都可以将病毒杀灭,但是在感染病猪组织以及在低温的条件下病毒存活时间可达6个月以上乃至数年。

□ 最有效的消毒剂是去污剂、次氯酸盐、碱类及戊二醛。

□ 8/1000的氢氧化钠(30 分钟)、次氯酸盐-2.3%氯(30 分钟)、3/1000 福尔马林(30 分钟)、3%邻苯基苯酚(30 分钟)可灭活病毒。

□ 碱类(氢氧化钠、氢氧化钾等)、氯化物和酚化合物适用于建筑物、木质结构、水泥表面、车辆和相关设施设备消毒,酒精和碘化物适用于人员消毒。

□ 不易消毒的设备放置在阳光下暴晒消毒。

四、临床排查

非洲猪瘟病猪主要临床表现差异较大,不易识别,但通常有以下几种或全部典型症状,包括高热、呕吐、腹泻或便秘,有的便血,虚弱、难以站立,体表不同部位(尤其是耳、鼻、腹部、臀部)皮肤呈红色、紫色或蓝色,有的咳嗽、呼吸困难,母猪流产、产死胎或弱胎。出现上述临床症状后,一般2-10 天内死亡。剖检可见内脏多个器官组织出血,脾脏显著肿大,颜色变暗,质地变脆。部分首次发生非洲猪瘟的养殖场,猪群发病非常急,最急性型不表现任何症状而突然死亡,无特征性剖检病变。

1、 流行病学

□ 传染源:带非洲猪瘟病毒野猪和发病家猪的分泌物及排泄物、含有病死猪组织或非洲猪瘟病毒污染的泔水、含非洲猪瘟病毒的猪肉及其制品,以及钝缘软蜱。

□ 传播途径:感染猪与健康易感猪的直接接触可传播非洲猪瘟病毒。非洲猪瘟病毒可通过饲喂污染的泔水、污染的饲料、垫草、车辆、设备、衣物等间接传播。可经钝缘软蜱叮咬生猪传播。消化道和呼吸道是最主要的感染途径。

□ 易感动物:家猪和野猪。其它哺乳动物包括人类均不感染非洲猪瘟病毒。目前报道的发病猪群主要是饲喂非洲猪瘟病毒污染泔水的猪。不同品种、日龄和性别的猪均对非洲猪瘟病毒易感。

□ 潜伏期:家猪为 4 天到 19 天不等。

2、临床表现

非洲猪瘟的特征通常是猪突然死亡、死前呈现体温升高、剖检可见多脏器出血。但临床上可能有多种表现:从感染7 天之内急性死亡,到持续几周或几个月的慢性感染不等(图2)。

主要临床症状:

□ 无症状突然死亡;

□ 发病率、病死率高;

□ 高热,体温升高 40.5 至 42℃;

□ 耳、四肢、腹背部皮肤有出血点、发绀;

□ 呕吐,腹泻或便秘,粪便带血;

□ 虚弱、步态僵直,不愿站立等;

□ 偶见眼、鼻有黏液脓性分泌物。

其他临床症状:

□ 精神沉郁、食欲下降;

□ 呼吸困难,湿咳;

□ 关节疼痛、肿胀;

□ 妊娠母猪流产、死胎、弱仔。

3、剖检变化

最明显的剖检病变是:

□ 脾脏显著肿大,一般情况下是正常脾的 3-6 倍,颜色变暗,质地变脆;

□ 淋巴结 ( 特别是胃肠和肾 ) 增大、水肿以及整个淋巴结出血,形态类似于血块;

□ 肾脏表面瘀点 ( 斑点状出血 )(图 3)。

剖检变化还可能包括:

□ 皮下出血;

□ 心包积液和体腔积水、腹水;

□ 心脏表面 ( 心外膜 )、膀胱和肾脏 ( 皮质和肾盂 )的出血点;

□ 肺可能出现充血和瘀点,气管和支气管有泡沫,严重肺泡和间质性肺水肿;

□ 瘀点、瘀斑 ( 较大的出血 ),胃、小肠和大肠中过量的凝血;

□ 肝充血和胆囊出血。

4、发现疑似病例的情况下应立即采取的行动

发现疑似病例,应立即按照《非洲猪瘟疫情应急预案》要求上报疫情(见附件)。

五、样品采集、包装与运输

1、 采样方法

全血

□ 采血过程中应保持无菌操作。

□ 采血前,先用酒精棉对采血部位进行局部消毒。

□ 采血完毕,进行局部消毒并用干棉球按压止血。

□ 使用含有抗凝血剂(EDTA-紫色盖)的真空采血管从颈静脉、前腔静脉或耳缘静脉抽取全血。

□ 如果动物已经死亡,可立即从心脏中采血。避免使用含肝素的真空采血管(绿色盖子)。

血清

□ 使用未加抗凝剂(红色盖子)的真空采血管从颈静脉、前腔静脉、耳缘静脉采血,或剖检过程收集血液样品。

□ 静置分离后,收集血清。如果血清是红色,这表明样品发生了溶血。通常已经死亡动物的血液样品易发生溶血。

□ 血清样品在分离后可以立即开展检测,如果需要储存,对于抗体检测,储存在-20℃,但是对于病毒检测,最好储存于-80℃。

器官和组织样品

□ 可采集脾脏、淋巴结、肝脏、扁桃体、心脏、肺和肾脏样品。脾脏和淋巴结的病毒含量最高。

□ 对于死亡时间较长的动物,可采集骨髓样品,也可采集关节内组织液。

□ 建议将样品保持在4℃,尽快提交给实验室。如无法及时送样,可将样品储存在冷库或液氮中。

□ 样品用10%缓冲福尔马林浸泡30分钟以上,病毒可被灭活,可用于PCR 检测。

□ 样品的最小需求量:血清 1mL;全血 1mL;组织样品 10g。

环境样品

□ 可多点采集养殖场环境拭子,如粪便、泔水、饲料等。

□ 建议样品 4℃以下保存。

2、样品的记录、保存、包装和运送

□ 为保证准确诊断,必须在适当温度下、以最快速度,将样品仔细包装、做好标记和相关记录,以最快路线送到最近的农业农村部指定的实验室。

□ 采样之前必须致电相关实验室,确保遵循正确的样品提交程序,保证所送样品能在第一时间完成检测及储存。

□ 做好样品运输过程中的安全保障工作,避免在运输途中感染其他动物,避免样品被污染。

□ 运送的样品必须附有足够数量的冷却材料(如冰袋),以防变质。

采样信息记录

□ 采样同时,应填写采样单。

□ 采样单应用钢笔或签字笔逐项填写(一式三份)。

□ 样品标签和封条应用签字笔填写。

□ 保温容器外封条应用钢笔或签字笔填写。

□ 小塑料离心管上可用记号笔做标记。

□ 应将采样单和病史资料装在塑料包装袋中,并随样品送实验室,每个样品应能对应到来源动物。

样品信息至少应包括以下内容:

□ 畜主姓名和养殖场地址;

□ 养殖场饲养动物品种及数量;

□ 疑似或被感染动物或易感动物种类及数量;

□ 首发病例和继发病例的日期;

□ 感染动物在畜群中的分布情况;

□ 死亡动物数、出现临床症状的动物数量及年龄;

□ 临床症状及其持续时间,死亡情况和时间等;

□ 饲养类型和标准,包括饲料来源等;

□ 送检样品清单和说明,包括病料种类、保存方法等;

□ 动物免疫和治疗史;

□ 送检者的姓名、地址、邮编、电话和邮箱;

□ 送检日期;

□ 采样人和被采样单位签章。

样品包装要求

推荐样品使用“三重包装系统”,并正确标记,以防止泄漏,内附采样单。

□ 直接盛装容器。样品应该储存在密封、无菌的主容器中,根据检验样品性状及检验目的选择不同的容器,如图4 所示。每个样品容器外应做好标记,注明样品名、样品编号、采样日期等,要能明确识别来自于哪只动物。

□ 二次包装。吸收材料也应放置在二次容器内。如果将多个易碎的主容器放置在单个二次容器中,则必须单独包装或分离,以防止相互接触。二次包装容器应贴封条,封条上应有采样人签章,并注明贴封日期,标注放置方向。

□ 坚硬的外部包装。外包装在盛装液体的情况下不得超过4升,在固体物质的情况下不得超过4 公斤(不包括冰的重量)。样品必须保持4℃温度或更低温度,并就近送动物疫病预防控制机构进行保存。注意:切勿冻结全血或混合有血凝块的血清。

□ 外包装标签和标记:

√ "B 类感染物质 " 标签,其正确的运输名称旁边标注 "B 类感染物质";

√ 采样负责人的全名、地址和电话号码;

√ 实验室联系人的全名、地址和电话号码;

√ 标签上标明“在4℃”、“在-20℃”或“在-80℃”保存;

六、附件(点击链接)

非洲猪瘟疫情应急预案

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